番茄红素是形成番茄成熟果实及其制品颜色特性的主要色素,其含量可作为果实颜色性状研究的一个指标。为了对番茄果实番茄红素的含量进行定量的分析,就可以借助于色差仪。本文介绍了色差仪在番茄果实番茄红素含量分析中的应用。
番茄红素是一种脂溶性的类胡萝卜素,具有较强的抗氧化性,对人类内皮细胞的凋亡、肿瘤的发生有抑制作用。最新研究还表明,限制食用番茄红素可导致氧化应激的显著增加并促使骨骼释放钙离子。番茄果实中番茄红素含量丰富,是天然番茄红素的主要来源。在番茄果实品质性状的研究中,番茄红素含量是重要指标之一。常用的番茄红素测定方法主要有分光光度计法和高效液相色谱法,均需要进行样本处理和番茄红素提取。为了提高测定效率、避免破坏样品,采用快速无损检测番茄红素含量就显得非常的重要,而色差仪法正好可以满足这一需求。
色差仪法就是通过使用色差仪,自动比对标准样板与被检品之间的颜色差异,直接输出CIELAB的L、a、b三组数据,根据L、a、b值判别颜色及其亮度。色差仪操作简单快捷,是目前适宜进行颜色无损检测的仪器,能够对番茄果实颜色进行精确测量。
用色差仪测定番茄果实的颜色,获得L、a、b值。随机选择充分成熟的果实,沿果面赤道一周均匀取3个点,得出L、a、b的数值后取平均值。每份材料测定3个果实,每个果实重复测定3次。色差仪的3个读数分别具有不同的功能。L值反映颜色的明亮程度,0表示黑色,100表示白色。a值反映红色或绿色物质的浓度,a>0表示颜色偏红,a<0表示颜色偏绿。b值反映橙色或蓝色物质的浓度,b>0表示颜色偏橙,b<0表示颜色偏蓝。
色度值反映色素的浓度,色度越大,颜色越鲜艳;色调值反映红橙绿蓝紫等颜色类型以及这些基本色之间的过渡颜色,180°表示纯绿色,90°表示橙色,45°表示橘红色,0°表示纯红色;色光值反映物质的表面颜色。根据测定的a、b及L值分别计算a/b和(a/b)2,并可根据以下公式计算色度值、色调值和色光值:
色度值=(a2+b2)1/2;
色调值=tan-1(b/a)(a>0且b>0);
色光值=2000×a/L×(a2+b2)1/2。
通过色差仪测量的L、a、b,根据相关的计算公式,就可以对番茄红素的含量进行估测。利用色差仪快速定量分析番茄果实中番茄红素含量的方法。这不仅有利于育种家们快速方便地初选高番茄红素含量的优良基因型,从而提高育种效率,而且也为番茄果实番茄红素含量的测定提供了一种快速无损的方法。
该法是借助色差仪,从亮度、红绿程度和黄蓝程度三个不同颜色变化方向,对果实表面颜色进行描述和测定,每个样品测定结果都含有I、a和b三个值。目前,该法除了在番茄上,还在其他多种园艺作物,如茄子、黄瓜、辣椒等的果实表面颜色测定中有着广泛的应用。
存在不足是在果色遗传研究过程中,对所建立的杂交后代分离群体进行测量时,每个样品的测定结果,都有三个指标,即不能把颜色用一个确切数值表示出来,造成后期果色分级和分类时,L、a和b的范围存在一定的重叠,即在一定水平上降低了分析结果的准确性。
首先需要把色差仪放在一个平稳的工作台上,接通电源后开机
每天打开色差仪时,均可在显示屏看到一个校正提示。初始校正可以反复按向下箭头键直至菜单显示,然后当“仪器校正”被高光后,按测试键。根据测量物品设置校正时间,比较精准的建议每次开机校正一次。
在校正后,应立即将切换模式开关扳至问号图标指示的位置进入设置模式,测量已经赋值的番茄红色板。标准应测出在所赋L、a、b值的±0.2以内。并且利用向上/向下箭头输入番茄红色板的赋值作为标准。
切换“模式开关”至测试位,如色差仪已进入待机模式,则按测试键开启,把样品杯孔扳放在测试孔上校正色差仪,按向下箭头键直至得到在顶部列出设臵名称的屏幕,按左或右箭头键直至所需的设臵显示。例如要测量酱,按左或右箭头键直至屏幕顶部显示“番茄酱”,搅和番茄产品使其均匀,但不要把空气引入样品,番茄糊在测量前只可用蒸馏水稀释到Brix为8.5,将样品注入或舀入2.5英寸(64mm)玻璃样品杯直至杯几乎满,将样品杯放在样品孔板的凹陷区,用样品杯不透明罩罩住样品杯; 按测试键测量样品;
如果想要打印测量值,按向上箭头/打印键。按此键也将保存测量到数据库;
从样品口移去样品杯,并小心洗涤后晾干。
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